从图4和表2可以看出，喷雾干燥得到的丝胶和2种方法提取的丝胶在远紫外区185～250 nm范围内无明显的双负峰，因此丝胶蛋白质二级结构没有a螺旋构象，这与表2分析的结果一致，a螺旋所占的摩尔百分比为零。喷雾干燥得到的丝胶和2种方法提取的丝胶在198 nm左右都出现强的负吸收峰，这主要是无规卷曲结构的特征吸收L1，因此丝胶二级结构以无规卷曲构象为主，所占的摩尔百分比为56左右(见表2)。表2结果表明，与喷雾干燥得到的丝胶相比较，2种方法提取的丝胶对蛋白二级结构分子构象的影响主要在于使不同比例的J3折叠结构转化为B转角。这种构象的变化可能与溶解度下降有关，对蛋白质其他功能性质的影响有待进一步研究。2．3．2红外光谱分析通过红外光谱的测定分析2种方法提取的丝胶固体粉末中蛋白质二级结构分子构象的变化，结果如图5所示。根据表3所示的蛋白二级结构分子构象红外光谱特征谱带和蛋白质特征吸收峰的归属。可知，3 300 cm-1是酰胺A N～H伸缩振动和O—H伸缩振动特征吸收峰，1 650～1 660 cm-1谱峰是酰胺I C～O伸缩振动，1 530 cm-1谱峰为酰胺IIC—N伸缩振动和N—H面内变形振动，1 230～1 240cm-1谱峰为酰胺III C—N伸缩振动和N～H面内变形振动，600 700 cm-1谱峰为酰胺IV N—H面外变形振动。从图5看出，喷雾干燥、醇沉和酸析得到的丝胶光谱在3 300cm左右都有明显的单峰，是蛋白质N—H伸缩振动和O—H伸缩振动特征吸收峰；在以无规卷曲构象特征吸收的酰胺I谱带1 650～1 660 cm-1处都有强的吸收峰，酰胺III1 235 cm-1附近处都有吸收峰，说明丝胶主要都是以无规卷曲结构为主，这与CD光谱分析的结果相似。在8折叠构象特征吸收的酰胺II 1 515～1 525 cm-1处醇沉和酸析得到的丝胶有明显的单峰，证实有8折叠的存在，而喷雾干燥得到的丝胶没有特征吸收，其1 546 cm-1处的特征吸收归属于无规卷曲构象特征吸收的酰胺II，这说明喷雾干燥得到的丝胶无规卷曲的构象所占的摩尔比较高，这与CD光谱分析的结果相符，说明喷雾干燥得到的丝胶分子构象比较柔软，因此这可能是其溶解度相对比较高的原因。与喷雾干燥得到的丝胶粗蛋白相比，醇沉和酸析得到的丝胶在2 950～2 850 cm-1处的2个吸收峰和1 400～1 450 cm-1处的2个吸收峰有细微的差异，这可能与经过酸处理和醇处理后蛋白的微细结构的变化有关，如cD光谱分析的结果所示酸处理和醇处理使丝胶蛋白二级结构分子构象中8转角构象的比例增加。引起这种构象变化原因有待于进一步研究。
3结论(1)与酸析法相比，低温乙醇沉淀法提取率较高，易去除乙醇，产品的灰分低，可有效地去除蚕腥味，而且所需设备简单，成本低，因此低温乙醇沉淀法是一种从丝绸生产废水中提取丝胶的新方法。(2)由于低温乙醇沉淀法提取的丝胶溶解度有所下降，因此通过CD和IR分析低温乙醇沉淀法提取的丝胶蛋白二级结构分子构象的变化，结果表明：低温乙醇沉淀法提取的丝胶蛋白二级结构主要是以无规卷曲的构象为主，因此低温乙醇沉淀法提取的丝胶分子具有一定的柔性，有较好的水溶性。此外，醇处理对构象的影响主要是使口转角构象的比例增加，这种构象的变化可能与溶解度下降有关。
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