5.1试样
经WXP整理剂(乳液)处理后的织物(毛巾)(整理剂有效浓度为0.5%);对照样品为普通织物(毛巾)。
5.2试验方法
试验用HBsAg的制备:用含小牛血清的PBS,将HBsAg稀释成浓度为l0Oμg/mL、含5%小牛血HBsAg悬液,置于-2OC冰箱中备用。
样本及对照片的制备:以无菌操作,用灭菌剪刀将末经洗涤的样品织物(毛巾)与对照织物(毛巾)分别制成1cm×1cm的样片和对照样片,置于无菌小试管内(1片/支)备用。
5.3 WXP整理剂(乳液)中和剂鉴定试验
第1组:将HBsAg悬液2OµL滴加于样片上,将小试管置于20±2℃水浴中,作用3h;加入lmL含10%小牛血清PBS,浸泡lOmin;振荡试管,洗下HBsAg。一式两份,各取样0.1mL进行检测。
第2组:将HBsAg悬液2OµL滴加于样片上,将小试管置于20±2℃水浴中,作用3h;加入lmL含10%小牛血清中和剂溶液的试管中,浸泡lOmin;振荡试管,洗下HBsAg。一式两份,各取样0.lmL进行检测。
第3组:将HBsAg悬液2OµL滴加于对照片上,将小试管置于20±2℃水浴中,作用3h;用灭菌镊子,将污染HBsAg的对照片加入含lmL中和产物溶液(一片样片加lmL中和剂溶液,振打混匀,中和lOmin)的试管中,浸泡lOmin;振荡试管,洗下HBsAg。一式两份,各取样0.lmL进行检测。
第4组:将HBsAg悬液2OµL滴加于对照片上,将小试管置于20±2℃水浴中,作用3h;加入1mL中和剂,浸泡lOmin;振荡试管,洗下HBsAg。一式两份,各取样0.lmL进行检测。
第5组:将HBsAg悬液2OµL滴加于对照片上,将小试管置于20±2℃水浴中,作用3h;加入1mL含l0%小牛血清PBS溶液的试管中,浸泡lOmin;振荡试管,洗下HBsAg。一式两份,各取样0.1mL进行检测。
第6组:向含有一样片的小试管内加入lmL中和剂,中和lOmin;振荡混匀,取样0.lmL进行检测。
第7组:向含有一样片的小试管内加入1.O mL lO%的PBS溶液,振荡混匀。一式两份,各取样0.lmL进行检测。
第8组:一式两份,各取0.1mL试验用含10%小牛血清的PBS溶液进行检测。
5.4 WXP织物灭活HBsAg病毒试验
试验时,将样片放于无菌小试管内(勿使样片的中央部分与小试管底部接触),分别标记试验浓度和作用时间。每个浓度和作用时间各取两个样片,将盛有样片的小试管,置于20±2℃水浴内10min,然后用微量移液器吸取HBsAg悬液20µL,滴于样片中央。待作用至规定时间,向小试管内加入lmL中和剂,进行检测。每一剂量检测2个样本,取两者的平均OD值计算S/N值。S/N值小于2.1时为阴性,表明可以破坏或灭活乙肝病毒HBsAg表面抗原。
阴性对照为一片样片加lmL中和剂,作用lOmin的中和产物。阳性对照为lmL中和产物加污染HBsAg的对照片l片,污染HBsAg时间和试验组作用时间相同。阴性及阳性对照,每个时间各取3个样本检测,与试验相同。
5.5结果
5.5.1中和剂鉴定试验结果
经3次重复试验,第1组S/N值为1.35,第2组S/N值为5.59,第3、4、5组S/N值分别为253.93、260.67、259.67,且3、4、5组之间误差率为l.04%。由此证明,所用中和剂在试验中可中和残留WXP整理剂(乳液)消毒液对HBsAg抗原性的破坏作用,且中和剂和中和产物对HBsAg的抗原性及检测系统无明显影响(参见表1)。
5.5.2经WXP整理后的织物对HBsAg抗原性破坏(灭活)结果
经3次试验证明,经WXP整理后的织物,作用时间为5-360min时,尚不能完全灭活(即破坏)HBsAg病毒,样品仍呈阳性;作用480min,S/N值分别为1.74、1.50和2.06,均小于2.1,为阴性(见表2、表3)。
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