曝气池活性污泥中7株高效菌株分离及鉴定-纺织技术中心

随着染料化学工业的迅猛发展,纺织、皮革、食品、日用化工等行业越来越多地应用合成染料于生产中.我国的染料年产量达到15万t[1],其中10%~15%会随着废水排入环境中[2].由于染料含有复杂的芳香环结构、品种繁多、化学稳定性高、生物可降解性低,且多数染料及其代谢中间产物具有致突变性、致癌性和其他毒性.染料废水对环境的污染已是广大环保科学工作者重点关注的问题之一.由于微生物具有繁殖速度快、适应性强等特点,利用高效脱色微生物进行环境污染整治不仅成本低,且可减少二次污染的产生,因此,采用生物法对染料污染进行治理越来越受到人们的关注[3-5].目前已证实多种偶氮、蒽醌等结构类型的染料均可被微生物降解,分离到的微生物主要包括细菌、真菌等.但对染料的微生物降解研究主要集中于偶氮染料[6-9],对于三苯甲烷类染料的研究报道较少.本文用三苯甲烷类染料碱性孔雀绿为试验材料,以细菌对其脱色率为检测指标,从福建石狮锦尚和伍堡污水处理厂不同的曝气池活性污泥中分离筛选对碱性孔雀绿染料脱色能力强的高效菌株,并对分离到的株菌进行鉴定,为印染废水的处理提供参考.

1·材料与方法

1.1材料

1.1.1分离样品

采自福建石狮锦尚和伍堡污水处理厂不同曝气池的活性污泥.1.1.2染料

采用三苯甲烷类的染料碱性孔

雀绿,购自化工商店,浙江龙游第八化工厂生产,最大吸收波长为617 nm.

1.1.3培养基

富集培养基:KH2PO41.8 g,Na2HPO4·12H2O 3.5 g,MgSO4·7H2O 0.2 g,FeCl3·6H2O 0.01g,蛋白胨2.0 g,牛肉膏3.0 g,葡萄糖5.0 g,染料0.05 g,蒸馏水1 000 mL,pH7.0,121℃灭菌20 min.

生长培养基:蛋白胨10 g,牛肉膏3 g,NaCl 5 g,琼脂15~20 g,蒸馏水1 000 mL,pH7.0~7.2,121℃灭菌20 min.

染料培养基:蛋白胨10 g,牛肉膏3 g,NaCl 5 g,染料50 mg/L,蒸馏水1 000 mL,pH7.0~7.2,121℃灭菌20 min.

脱色培养基:麦芽糖3%,染料50 mg/L,硝酸铵1%.

染料固体培养基:染料培养基,琼脂20 g,pH 7.0~7.2,121℃灭菌20 min.

1.1.4仪器

SPX-250B-Z生化培养箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂),光学显微镜PM-10AD(Olympus),恒温摇床HQ45(武汉科学仪器厂),灭菌消毒器CRDX-280型(上海电安医疗器械厂),分光光度计723(上海精密科学仪器有限公司),电子天平(上海精科天平厂),台式离心机(上海安亭科学仪器厂),CS-15R冷冻高速离心机(Beckman),pHS-3C精密酸度计(上海雷磁仪器厂),SW-GF-1F洁净工作台(上海博讯实业有限公司医疗设备厂).

1.2方法

1.2.1富集及分离

从污水中取出5 mL的样品,接入含50 mL富集培养基三角瓶中,30℃静置培养24 h,取出染料颜色有变化的三角瓶,取脱色菌液,经适当稀释涂布于含染料的固体分离培养基平板上,30℃恒温培养3~5 d,根据菌落形成的脱色圈,挑选出具有脱色能力的菌株,接种于含50 mg/L染料培养基培养3

d,后把脱色液涂布到牛肉膏蛋白胨琼脂平板上,30℃培养24 h,分离得单菌落.

1.2.2纯化

将分离挑取的单菌落在平板上划线、纯化,并镜检纯度.经过多次挑单培养后得到纯培养.

1.2.3脱色能力的测定

用牛肉膏蛋白胨培养基摇床振荡培养菌体到一定的浓度进行纯种扩大培养,取1 mL培养好的菌液,加到含20 mL脱色培养基的100 mL锥形瓶中,30℃静置培养,24 h后取样,3 500 r/min离心30min,在617 nm处测定上清液的吸光度值,并以不加菌的脱色培养基为对照,计算脱色率,以脱色率的大小来表示染料的脱色能力.