CMC粘度法是纤维素酶活力检测的方法之一,作者用它测定了一批市售纤维素酶的活力,又分别用SBDI-A和Cellusoft L酶进行了多项工艺测试,在此基础上提出;在织物处理过程中酶对纤维素纤维有较多的吸着,随着处理时间的延长,酶的作用力逐渐减弱直至完全衰竭,并认为CMC粘度法是一个简易可靠值得推荐的活力定量检测方法,它可以用来评价酶的力份,测定酶的储存稳性定,用以筛选酶的增效剂和抑制剂,可以用来测定酶处理反应,为制订工艺配方提供科学依据。
关键词 纤维素酶 织物酶处理 分析测试方法
1.织物处理用纤维素酶及其活力测试研究
1.1 酶的活力测试方法现状:
纤维素酶是由霉菌等培养得到的一个自然的多组份混合物,它的生物催化作用可以使纤维素纤维发生水解,有效地控制水解速度和水解率可以得到纤维素纤维织物的不同处理要求,纤维素酶对纤维素纤维的作用分四个程序;渗入,内切,外切,糖化。
渗入决定于酶的分子量大小和纤维的内表面可及度,内切(在任意部位把纤维素苷键切断)主要决定于组份中Cx酶的活力,外切(在纤维素的一端顺序切下一个个双糖)主要决定于C1酶的活力,糖化决定于把多糖转化为单糖的葡萄糖酶Co的活力。多种组分的各自活力和协调构成了单位时间内纤维素纤维的降解糖化量,酶的活力测定对织物酶处理工艺设计有重要意义。
酶的活力测定,有称作催化活力测定,测定方法有;滤纸崩溃法,总糖比色法,粘度法等。滤纸崩溃法属于定性检测,总糖比色法重点反映C1与Co的协调作用,粘度法重点反映Cx与C1的协调作用,两者都可以用作定量测定。至今活力测定尚未有统一的方法,表示活力大小的计量单位更是多种多样,丹麦NOVODISK(诺和诺得公司)早期采用总糖比色法(AF187.2/1-GB82-08-10)一分钟水解产生1μmol葡萄糖称为一个NCU活力单位(NCU=NOVOCellulase Unit)。后来又采用粘度法(AF275/1-GB1989-02-03)用一种活力为880EGU的内切葡聚糖酶,以其作用于CMC的粘度曲线为对比标准,测得的对应值以EGU/克作为一个内切酶活力单位(EGU=EndoGlucase Unit)。
纺织染整行业应用酶处理技术已有多年,但还没有建立起酶的活力测定方法,无法检出酶商品的好坏,不能检查酶的储存稳定性,失去了制订酶处理工艺配方的科学依据。对于使用厂来说,迫切需要有一个简便的,统一的,实用的工艺检测方法。有鉴于此,二年多来我们在测试方面做了一些探索,现在可以认为;采用一般的CMC粘度测试法,以CMC的浓度— 粘度关系曲线作为对应,定出酶的活力计算单位。可以用作对酶商品的考核,现将具体内容介绍如下;
1.2 CMC粘度法的检测方法以及有关活力的概念
1.2.1 测试仪器与方法
使用仪器:NDJ-1Rotational Viscometer 上海天平仪器厂
计算公式:(1/V1-1/Vo)×1000/10(分钟)
相对活力含义:在30℃水溶液中,一克酶作用于20克CMC,反应十分钟,相当于有10克CMC水解时,其相对活力为100。
1.2.2 具体操作
取醚化度为85%的CMC,加水制糊配成1%的溶液,取纤维素酶加水配成1克/升的溶液,HAC 0.2M三者按2∶1∶1混合(即15ml∶7.5ml∶7.5ml。中性酶则不加醋酸液,以水代之),在30℃条件下反应十分钟,在回转式粘度计上,用转子,转速6RPM,注入混合液20ml。
酶活=(1/V1-1/Vo)×10000/10(反应时间“分”)
Vo=不加酶的CMC混合液粘度
V1=加酶后的CMC混合液粘度
1.2.3 CMC的浓度-粘度相关曲线(值)
计算:
粘度7.5时,活力=(1/7.5-1/30)×10000/10=100
当样品混合液的粘度与CMC浓度减半时的数值相同时,活力指标即为100。
1.3测试数据(随机采样):
1996.1.4测定
1995.9.29测定
1995.6.28测定
1995.3.1测定
1993.10测定
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