1.2.2 纯化
将分离挑取的单菌落在平板上划线、纯化,并镜检纯度.经过多次挑单培养后得到纯培养.
1.2.3 脱色能力的测定
用牛肉膏蛋白胨培养基摇床振荡培养菌体到一定的浓度进行纯种扩大培养,取1 mL培养好的菌液,加到含20 mL脱色培养基的100 mL锥形瓶中, 30℃静置培养, 24 h后取样, 3 500 r/min离心30min,在617 nm处测定上清液的吸光度值,并以不加菌的脱色培养基为对照,计算脱色率,以脱色率的大小来表示染料的脱色能力.
式中,A为不加菌液的吸光度值,B为接菌培养一定时间后上清液的吸光度值,选择脱色效果好的菌株进行鉴定.
1.2.4 菌株鉴定
参照《伯杰氏细菌鉴定手册》[10]和《一般细菌常用鉴定方法》[11]对分离纯化后的菌株进行形态特征、生理生化特征、菌体染色等鉴定.
B2菌株和B6菌株进一步采用美国BD phoenixTM全自动细菌鉴定/药敏系统自动鉴定,由福建省疾病控制中心完成.
2 ·结果与讨论
2.1 筛选结果
经过筛选,得到了7株对三苯甲烷染料碱性孔雀绿有比较好的脱色效果的细菌(见表1), 7株菌株分别编号为B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7.
由表1可知,不同的菌株对染料脱色效果不同, B2菌株脱色效果最好,脱色率高达99.19%.
2.2 初步鉴定
2.2.1 菌体染色结果
不同菌株染色结果如表2所示.
2.2.2 培养特征
菌株在营养琼脂平板上划线,于28℃培养18~24 h,观察菌落的形态、大小和生长情况.B1菌株:菌落为淡黄色,菌落偏小,直径为3~4 mm,边缘圆整,规则,放射状,脐状.
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