将上述反应前后的反应液稀释100倍,使之在线性方程的浓度范围之内。稀释后的溶液在250nm波长下测试反应前后吸光度分别为1.592和1.491。根据线性方程计算反应前后对苯二甲酸浓度分别为2.000g/L和1.867g/L。
代入公式(1),酶活U=△C/M/△t×103,(其中M为154.12,△t为30)得到菌悬液酶活为:U=0.029。
2.5补加酵母粉为有机氮源,细菌TJ降解原儿茶酸的酶活
在催化反应液中加入酵母粉作有机氮源可有效催进微生物对碳源的消耗速率,从而提高酶酶活。为了确定酶活的提高程度,向反应液中加入3g/L的酵母浸出粉,同时加入4g/L磷酸二氢钾和6g/L的磷酸氢二钠作缓冲溶液,维持体系稳定的pH值为7左右,最后加入原儿茶酸配成2g/L的溶液。
将底物溶液灭菌后加热到37℃,将离心后的菌体悬浮在灭菌后的溶液中,混合均匀后,在37℃,200r/min振荡反应,并开始计时。经过30min后,取出反应液,迅速95℃水浴灭活5min,检测底物变化。
将上述反应前后的反应液稀释100倍,使之在线性方程的浓度范围之内。稀释后的溶液在250nm波长下测试反应前后吸光度分别为1.592和1.388。根据线性方程计算反应前后对苯二甲酸浓度分别为2.000g/L和1.731g/L。
代入公式(1),酶活U=△C/M/△t×103,其中M为154.12,△t为30)得到菌悬液酶活为:U=0.058。与2.4中结果比较发现,加入酵母粉可将菌悬液的酶活提高1倍多。
3结论
本测试方法采用菌悬液为催化介质,以含苯环物质为底物,通过催化降解过程中苯环吸光度的变化,绘制出相对应的标准曲线,经过特定公式的计算,即可得出相应的酶活数据。与现有技术相比,本发明测试方法对于含苯环的物质降解过程中酶活的检测具有很好的普适性,适用于多数含苯环化合物的降解过程中酶活的直接测定,且测试过程简单,不需要贵重仪器设备,非常适于实际测试使用。
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