1.4.2配制底物溶液：
根据待测活力的酶或菌悬液的催化条件，配制底物溶液；所述的催化条件是指3-4g/L磷酸二氢钾和6-7g/L的磷酸氢二钠作缓冲溶液，维持体系稳定的pH值=6.8-7.0，最后加入含苯环的底物，包括对苯二甲酸或原儿茶酸等，配成1-2g/L的溶液。
研究表明，在所述催化反应液中，加入1-3g/L的酵母浸出粉作有机氮源，可有效催进微生物对碳源的消耗速率，从而提高酶活。
1.4.3催化反应：
将底物溶液和酶液预先分别加热到各自最适反应温度（例如37℃），然后将底物溶液和酶液混合为反应液，在最适反应条件是指温度，转速振荡培养器的转速等，例如：37℃，200r/min下，使之发生催化反应，并开始计时，经过催化反应设定的时间，例如30min后，取出反应液，迅速高温灭活，检测底物浓度的变化；
1.4.4测定反应液中的苯环含量：
将上述催化反应前后的反应液稀释相应倍数，例如50-100倍，使其吸光度在所述线性方程范围内；稀释后的反应液在最大吸收波长下测试反应前后的吸光度，并根据所述线性方程计算反应前后的底物浓度。
1.4.5计算微生物降解苯环的酶活：
在本发明测试方法中，酶活的定义是：1ml酶液或菌悬液，在1min时间内，降解1μmol含苯环物质中的苯环，定义为一个酶活单位U/ml。依据下述公式（1），计算获得微生物降解苯环的酶活：
酶活U=△C/M/△t×103 （1）
（1）式中，△C表示催化反应前后反应液中底物的浓度变化，单位为g/L；M表示底物的相对分子量，单位为g/mol，△t表示催化反应时间，单位为min；103为各个量的单位与规定酶活单位之间的校正量。
2实验结果与分析
2.1标准曲线
采用磷酸盐缓冲液（3g/L磷酸二氢钾和7g/L的磷酸氢二钠）配制浓度分别为1,2,5,10,20,30,40mg/L的对苯二甲酸溶液（标准溶液），在紫外分光光度计上对所配制的对苯二甲酸溶液进行全波长扫描，确定其最大吸收波长在240nm，然后在240nm波长下，测定所述不同浓度的对苯二甲酸溶液的吸光度，对应浓度-吸光度绘制的曲线图（参见图1），找出其线性拟合度达标（拟合度达到0.99986）的浓度范围为1-40mg/L，拟合得到线性方程（2）：Y=0.08342+0.07584×X，其中X代表对苯二甲酸浓度，Y代表紫外吸光度，线性方程（2）用于计算对苯二甲酸降解过程中苯环含量的变化。
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采用磷酸盐缓冲液（4g/L磷酸二氢钾和6g/L的磷酸氢二钠）配制浓度分别为1,2,5,10,20,30,40mg/L的原儿茶酸溶液，全波长扫描，确定其最大吸收波长在250nm，在250nm波长下测定不同浓度溶液的吸光度，对应浓度-吸光度做出曲线图（参见图2），找出其线性拟合度达标（拟合度达到0.99971）的浓度范围为1-40mg/L，拟合得到线性方程（3）：Y=0.07613+0.07579×X，其中X代表原儿茶酸浓度，Y代表紫外吸光度，线性方程（3）可用于计算原儿茶酸降解过程中苯环含量的变化。
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