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一种微生物降解苯环的酶活测试方法

来源:印染在线 发布时间:2012年01月04日

引言

含苯环类物质在化学工业中具有广泛的应用,因此形成的工业废水数量较多,且苯环类物质对环境有一定毒害作用,对生物甚至有致癌致畸作用,因此,苯环类物质的降解,是研究的热门课题。生物降解是污染物质降解常用的方法,苯环具有一定的生物降解性,因此,微生物降解含苯环物质也有较多研究。

含苯环物质的降解过程中,苯环的打开是评价降解情况的重要指标。因此,要评价一种微生物对污染物的降解能力,考察其生物酶对苯环的降解速率是关键,也就是降解苯环的酶活。现有酶活研究方法中,一般通过考察某个侧基发色团的变化来判断酶活力,但因每种物质的发色团不同,导致这类测试方法不具有很好的普适性。有关直接采用苯环开环法来测定酶活的文献尚未见报道。

针对现有酶活测试方法的局限性,本文提供一种微生物降解苯环的酶活测试方法,该测试方法具有很好地普适性和直接性,且简便易行。

1实验材料与方法

1.1材料

杆菌B-F:从废水中分离获得;各种化学试剂:从天津科密欧试剂公司购得。

1.2仪器与设备

空气浴振荡仪,生化培养箱,灭菌器,可见光分光光度计(VIS-723型,上海精密科学仪器有限公司),紫外分光光度计(UV2401,日本岛津公司)

1.3培养基

微生物生长繁殖所需培养基应包含其生长所需的微量元素和基本的碳源,本实验中所用培养基为选择性培养基,依靠对苯二甲酸(TA)提供碳源,并加入酵母浸出粉作为有机氮源,用于驯化微生物,并获得较大量的菌体,使其具有更好的催化改性能力。具体成分如表1所示。

1.4方法

1.4.1制作含苯环底物(以下简称底物)浓度与吸光度之间关系的标准曲线:

配制一系列不同浓度的含苯环物质溶液,并在紫外分光光度计上进行全波长扫描,进而确定不同浓度的含苯环物质溶液的最大吸收波长,然后在其最大吸收波长下测定不同浓度的含苯环物质溶液的吸光度,绘制底物浓度与吸光度之间关系的标准曲线图,找出底物浓度与吸光度之间线性拟合度达到0.999以上的底物浓度范围,拟合得到用于计算降解过程中苯环含量变化的线性方程;

 

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