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脱氧酶的活力测试方法

来源:印染在线 发布时间:2010年09月30日
用萃取化学公司法(Amano 法的改进型)测定液态过氧化氢酶活力 原理:过氧化氢酶催化分解过氧化氢,生成氧和水。未被分解的过氧化氢与碘化物发生氧反应,生成碘。可用硫代硫酸钠作为指示剂,淀粉滴定碘的浓度。 定义:一个过氧化氢酶单位相当于在规定条件下每分钟分解1μ mol过氧化氢所需的酶量。一.试剂: 1.硫酸(1N):用蒸馏水将1.33ml浓硫酸稀释至100ml. 2.碘化钾溶液:取10.0g碘化钾溶于蒸馏水中,并定容至100ml 3.七钼酸六铵溶液:取1.0g四水七钼酸六铵(钼酸铵)溶于蒸馏水,并定容至100ml。 4.淀粉溶液:取0.5g可溶性淀粉用蒸馏水调和,加入70ml沸蒸馏水中2~3分钟,冷却后定容至100ml. 5.底物溶液:用蒸馏水将0.125ml 30%过氧化氢定容至100ml. 6.硫代硫酸钠溶液:0.005N 7.酶溶液:用蒸馏水溶解酶,并稀释。1ml配制溶液应当含有约10μ.二.操作步骤: 用移液管将1.0ml酶溶液滴入一只容量为100ml的锥形烧瓶,并调温至37℃。加5.0ml同样也预热至37℃的底物溶液,同时按动秒表。精确保温 5ml后加2.0ml硫酸,反应就此终止。随后滴加1.0ml碘化钾溶液,1滴七钼酸六铵溶液和5滴淀粉溶液,并用硫代硫酸钠溶液滴定,直至溶液退去色泽为终点。以同样的方法测定空白值,只不过这里不是用1.0ml酶溶液,而代之使用1.0ml蒸馏水。三.计算: 用以下公式计算活性:(B-H)×2.5×V =μ/ml5 式中:B—用于空白值试验的耗量(ml) H—用于主值试验的耗量( ml) 2.5—1ml0.005N 硫代硫酸钠溶液▲2.5μmol过氧化氢 5—反应时间(min) 举例:将一待测的过氧化氢酶样品按1:2500稀释。用于主值的滴液
耗量为20.8ml,用于空白值的耗量为45.3ml。 (45.3-20.8)×2.5×2500 =30630μ/ml 5 ★附:简易测试方法: 5g/L双氧水,脱氧酶0.006% ,35℃~40℃,不需调节PH;分别在5分钟、10分钟、15分钟;用双氧水试纸测试双氧水残留量; 并可分别测试:50℃、60℃重复上述试验,验证稳定情况;

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