一 滤纸崩溃法1 原理 纤维素酶能分解滤纸，产生葡萄糖等还原糖，与3，5-二硝基水杨酸显色剂作用，可生成橙黄色络合物，用比色法能够定量测定还原糖的生成量。本方法在最适条件下，以单位时间内一定量的酶制剂释放出的葡萄糖量，来表示纤维素酶制剂的活力。2 试剂2.1 3，5-二硝基水杨酸显色剂称取10g 3，5-二硝基水杨酸（熔点168-169℃，若熔点偏低，则应重结晶，方法是称取10g 3，5-二硝基水杨酸，加50mL水，加热溶解，冷却析出结晶，过滤，用冷水洗涤，干燥后得白色结晶），溶于蒸馏水中，加入20 g氢氧化钠，200 g酒石酸钾钠，加水500 mL，加热溶解后，加入重蒸酚2g、无水亚硫酸钠0.5 g，加热搅拌，待全部溶解后，冷却，移到1000 mL容量瓶中，稀到刻度，放置一周后过滤备用。此显色剂应贮存于棕色瓶中。2.22.2 缓冲溶液0.04M，pH值为4.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液。33 方法3.13.1 酶液制备按工艺要求的浓度、pH值等配制酶处理液。3.23.2 酶解分别吸取酶处理液0、0.5、1.0、1.5、2.0mL，置于试管中，用pH值为4.5 的醋酸-醋酸钠缓冲溶液补足到2.0 mL。置于40℃水浴中保温数分钟后，在每管酶液中加入1×1cm2的新华1号层析滤纸6片，立即记时，准确反应60min，然后立即在沸水浴中加热10min，使酶失活。3.33.3 显色 在上述每管酶解液中，加入3 mL 3，5-二硝基水杨酸显色剂，在沸水中加热15 min，冷却，加蒸馏水10 mL，摇匀，用分光光度计在550 nm波长下，用1 cm比色皿，以空白为对照，测定其光密度。以光密度为纵坐标，各管酶浓度为横坐标作图，应成一通过原点的直线。取直线上任意一点计算即可。如成曲线关系（直线弯曲），应将酶液进一步稀释后再进行测定。3.43.4 葡萄糖标准曲线绘制 准确配制1000