表面活性剂的判别试验对阴、阳离子表面活性剂显色比较明显，对非离子、两性表面活性剂可能难以确证，可用这两种表面活性剂的确证试验来进行确证。

(1)聚氧乙烯型表面活性剂的确证试验一一硫氰酸钴试验。

①基本原理：钴离子(粉红色)在饱和醇溶液中可与硫氰酸根生成蓝色的硫氰酸钴络合物：CO2++4SCN-==Co(SCN)42-，这个络合物不十分稳定，当溶液稀释，其反应即逆向进行。由于非离子表面活性剂胶束的存在，使胶束内形成醇的局部饱和，硫氰酸钴可保持稳定，溶

液呈现蓝色；若无聚氧乙烯非离子表面活性剂存在，则呈现钴离子的粉红色。

②硫氰酸钴试剂的配制：将174g硫氰酸铵和28g硝酸钻溶解于1L蒸馏水中。

③试验方法：取1％的试样水溶液5mL，加入5mL硫氰酸钴试剂溶液中，摇动使充分混合，放置2h后观察溶液颜色变化。

④结果判别：

a若呈现蓝色，则表示有聚氧乙烯型非离子表面活性剂存在；若呈现红紫色乃至紫色则无聚氧乙烯型非离子表面活性剂存在。

b．若有蓝色沉淀和红紫色生成，表示有阳离子表面活性剂存在。

(2)两性表面活性剂的确证试验一一酸性橙Ⅱ试验。

①测试原理：酸性橙Ⅱ与两性表面活性剂及阳离子表面活性剂生成1：1的配合物，在pH值为1—2时两者均可被氯仿萃取；在pH值为3—5时，只有阳离子表面活性剂的配合物可被萃取。因此可根据pH值不同时，氯仿萃取液吸光度的差别定性区分两性或阳离子表面活性剂。

②试剂：

酸陸橙Ⅱ试剂：将O。1g酸性橙Ⅱ(市售品应在乙醇中重结晶两次)溶于100mL水中。

pH值为1的缓冲溶液：称取氯化钾(KCl。3H20)5．1g，用190mL蒸馏水溶解后加入11mL浓盐酸(36％--38％)，混合均匀。

pH值为5的缓冲溶液：称取醋酸钠9．1g，用200mL蒸馏水溶解后加入冰醋酸(99％)2mL，混合均匀。

氯化钾溶液：称取22．3g氯化钾溶于100mL蒸馏水中。

③测试步骤：

计测定484nm处的吸光度。

按上述操作，在分液漏斗中加入1mL酸性橙Ⅱ溶液、2mLpH值为5的缓冲溶液、5mL同种试样溶液。边振荡边加入2mL氯化钾溶液，用上述同样体积的氯仿萃取4次，并使各萃取液通过一底部紧密装有0．3g玻璃棉(预先用氯仿润湿)的滴定管(φ10mm×200mm)，控

制流速12—15mL／min，将萃取液收集于50mL容量瓶中，加入5mL乙醇，用氯仿冲洗玻璃棉并稀释至50mL。测定484nm处吸光度。

④结果判别：比较两次测得的吸光度值，若两次测得的吸光度一致，表示试样为阳离子表面活性剂；若第二次(pH值为5)N得的吸光度接近0，而第一次测得的吸光度较大，则表示该试样为两性表面活性剂。

⑤说明：

a．如五分光光度计测定吸光度，也可将两次萃取样放人比色管进行目视比色。色泽深则吸光度值较大；色泽接近则吸光度值也接近。