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淀粉酶活力的测定

来源:印染在线 发布时间:2009年06月05日
(1)测试原理:淀粉遇碘产生蓝色,可以在一定量的淀粉中加入不同量的淀粉酶制剂,一定时间后,不出现蓝色且酶制剂用量最少的那个试液可以认为刚好将淀粉全部分解,可根据酶制剂的用量、淀粉的用量以及反应时间来计算该淀粉酶的活力。 (2)仪器与试剂: 仪器:恒温水浴锅;比色管(或试管);温度计。 淀粉试液:分别称取可溶性淀粉工g(精确至0。01g)和食盐5g,用少量蒸馏水分别溶解后,移人1000mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀备用。 c(½I2)=0.1mol/L.碘溶液:称取1.3g碘片及3.5g碘化钾,溶于lOOmL蒸馏水中,在棕色瓶中保存。 酶制剂溶液:称取(精确至O.01g)淀粉酶制剂25g(或吸取25mL),溶解后移人1000mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀备用。 (3)操作步骤:在已编号的10只比色管中分别加人5mL淀粉试液,另取一只比色管,内盛蒸馏水,插入温度计。一起放人恒温水浴锅中保温(BF一7658 酶 60℃,胰酶40℃),当温度恒定在所需温度后,按管号分别加入1.0—1.9mL(间隔为O.1mL)配制好的酶制剂溶液,计时保温60min。60min后,在每管中加人数滴c(½I2)=0.1mol/L碘溶液。记录不呈蓝色且加入酶制剂溶液最少的试管中加入酶制剂溶液的体积V(mL)。 (4)计算: 酶活力=[mg/(g·h)]=W1×5/(W2/1000)×V×1=5000W1/W2×V式中:wl一一称取淀粉的质量,g; w2一一称取酶制剂的质量,g; V一一不呈蓝色试管中淀粉酶用量最少所加酶制剂溶液的体积,mL。 (5)说明: ①由于酶制剂的活力变化较大,如完全按上述操作,所加酶制剂溶夜体积可能不一定在测试范围中,因此可以先加大酶制剂溶液体积的间隔,找到一个大
致用量,再在其左右用0.1mL的间隔较精确测定使淀粉刚好完全分解时所加入酶制剂溶液的体积。 ②酶活力也可用酶的转化力来表示,即计算每小时每克(或毫升)酶制剂转化淀粉的克数。

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