1.1原理福林试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸等),它使蛋白质及其水解产物呈上述反应,利用这个原理可以测定蛋白酶活力的强弱。以酪蛋白为作用底物,在一定pH值和温度下,同酶液反应,经一段时间后加入三氯乙酸,终止酶的反应,并使残余的酪蛋白质沉淀,同水解产物分开。经过滤后取过滤液(含蛋白质水解产物的三氯乙酸溶液),用Na2C03碱化,再加入福林试剂使之发色。蓝色反应的强弱与过滤波中蛋白水解产物的量成正比例,而水解产物的量又同酶活力成正比。因此,根据蓝色反应的强弱可以计算出蛋白酶的活力。1.2操作方法1.2.1 试剂1.2.1.l福林试剂于2000ml磨口回流装置内加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(NaMoO4·2H2O)25g。水700ml,85%的磷酸50ml,浓盐酸100ml,文火回流10h,加入硫酸锂(Li2SO4)150g,蒸馏水50ml,混匀取去冷凝器,加入几滴液体溴,再蒸沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色。若溶液有绿色,需再加数滴液溴,再蒸沸除去,冷却后定容至1000ml,过滤,置于棕色瓶中保存,此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。1.2.1.2 0.4mol/l的TCA溶液称取三氯乙酸65.4g,加水定容至1000ml。1.2.1.3 0.8mol/l的碳酸钠溶液称取无水碳酸钠84.8g,加水溶解,定容至1000ml。1.2.1.4 pH值为3.6的醋酸缓冲液称取NaAc·3H20 16g与268ml浓度为6mol/l的醋酸溶液混合,稀释定容至1000ml。1.2.1.5 2%酪蛋白溶液称取干酪索20g,加入0.lmol/l的氢氧化钠20ml,在水浴中加热溶解,然后用pH值为3.6的醋酸缓冲液定容至10