羊膜上皮细胞的接种培养取生长良好的人羊膜上皮细胞Wish株（中国科学院上海细胞生物学研究所），生理盐水漂洗两次，加入025%胰蛋白酶消化后，培养液终止消化，离心，弃去液体，加入10%小牛血清的RPMI-1640双抗（青霉素1105U/L，链霉素100mg/L）培养液稀释成1107/L细胞悬液，接种5mL于已固定有纤维蛋白块的培养瓶中，置入375%CO2恒温培养箱（SHELL/JB）中培养。
形态学观察倒置显微镜观察采用倒置显微镜（Olympus），分别观察各培养瓶内纤维蛋白块及人羊膜上皮细胞在纤维蛋白块上生长情况。Giemsa染色倒置显微镜观察接种人羊膜上皮细胞2d后，吸弃培养液，细胞用01mol/LPBS漂洗2次，用固定液（甲醇冰醋酸31）固定30min后，弃去固定液，Giemsa工作液染色20min，蒸馏水漂洗后，倒置显微镜下观察并拍照。
扫描电子显微镜观察接种羊膜上皮细胞培养2d后，吸弃培养液，01mol/LPBS漂洗细胞两次，用01mol/LPBS配制的2%戊二醛固定液固定后，采用扫描电子显微镜（KYKYAMRAY1000B）观察并拍照。
结果1Giemsa染色观察纤维蛋白支架呈细网状，较透亮，在不同视野纤维蛋白支架上均有人羊膜上皮细胞的生长，细胞多呈圆形。纤维蛋白支架Giemsa染色后变为橘黄色，羊膜上皮细胞染色后呈紫蓝色，细胞核蓝色，随细胞数目增多，蓝色加深。
扫描电子显微镜观察纤维蛋白支架的形态纤维蛋白支架呈不规则的立体空间结构，表面纵横交错，多层次网络状。羊膜上皮细胞形态羊膜上皮细胞生长较好，细胞呈凸起球状物，绒毛状。细胞之间有较长的伪足等多种形状的接触（4）。
讨论近年来，由于生物材料具有可塑性强可吸收可降解以及不引发机体的免疫反应等特点，受到研究者广泛的关注并不断应用于临床修补和细胞培养的载体。王一飞等<1>以血纤维蛋白凝块及脂肪组织为支架构建三维组织模型培养巨噬细胞和3T3成纤维细胞，结果发现两种细胞在支架上生长分化良好。
人羊膜上皮细胞间的细胞接触已有的研究用于羊膜腔封闭的生物材料尽管能阻止羊水渗漏，但大多为机械性封闭作用<2-4>，封闭后是否能够促进羊膜破口修复是更需要关注的问题，破口处的封闭物可能退缩或被降解，若其边缘的羊膜上皮细胞能够生长并修复胎膜破口，胎膜的完整性和组织学结构得以恢复，则可以达到最佳的治疗效果。
人羊膜上皮细胞间的细胞接触体外构建的纤维蛋白支架块由纤维蛋白原纤维结合素因子复合物%因子凝血酶抑肽酶和钙组成，是一种天然高分子材料，来源于哺乳动物（牛）和人血清，它是模仿血凝级联反应的最后阶段，形成稳定的血凝块，可对抗空气或液体的通过；具有生物相容性，可吸收性无毒性等特点，特别是能快速形成，维持时间长，纤维蛋白溶解缓慢，我们研究发现培养瓶中的纤维蛋白块置入CO2培养箱内，持续20d未见明显降解，提供了羊膜上皮细胞在纤维蛋白支架生长增殖的充足时间。
[1][2]下一页>>
相关信息 
推荐企业 推荐企业
推荐企业
您所在的位置：
