1．2．4稳定性实验
取白屈菜红碱标准溶液2mL，按2．3节标准曲线下方法每隔1h测定其吸收度，观察吸光度值随时间变化情况。
1．2．5精密度实验
取对照品溶液2．0mL，按1．2．3节方法制备标准品供试液和空白对照液，在425rim波长处测定，重复测定5次。
2试验结果
2．1最大吸收波长确定
由图1可以看出，用白屈菜红碱作对照，溴甲酚绿染色比色法测定生物碱得最大吸$t~-K为425nnl。
根据1．2．3所得的数据，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。经统计处理，得线形回归方程为：Y=4．2566一0．0066，R2=0．9994。由图2可以看出，生物碱浓度在0—0．2mg／mL范围之内具有良好的线性关系。
2．3稳定性实验
稳定性试验结果表明，待测液在5h内稳定，其RSD=0．657％(n=5)。
2．4精密度实验
精密度试验结果表明，重复测定5次。结果RSD=0．43％(n=5)。
2．5花椒生物碱含量测定结果
将花椒粉碎至60目，精确称取3份，每份5g，分别加入95％乙醇进行提取，并用稀盐酸调节pH值=3，超声提取1h，过滤，滤液用浓氨水调节至中性，取调节至中性。取2mL，按照以上1．2．3节方法，依次精密溴甲酚绿磷酸缓冲液2mL和10mL氯仿溶液，振摇1min后，倒入分液漏斗中静置1h，分取氯仿层，在425nm波长下测吸光度值，同法操作的氯仿为空白，测定吸光度。将测得的吸光度值代人标准曲线，计算求得花椒中生物碱的含量为0．95％(RSD=1．02％，n=3)。
3讨论
(1)本实验采用酸性染料比色法，是根据在一定pH介质中，生物碱类与氢离子生成阳离子，一些酸性染料在此条件下可解离成阴离子而与上述阳离子定量结合成有色络合物，可被有机溶剂定量提取的原理，用白屈菜红碱作为标准物质在pH值=7．6的条件下与溴麝香草酚蓝定量显色，花椒中的生物碱在此条件下凡能与溴麝香草酚蓝显色的均可被测出，从而求得相对总生物碱的含量。该法灵敏度高，结果稳定，操作简便，易于推广应用，用于花椒的质量控制。
(2)由于生物碱成分都易溶于酸溶液，也溶于乙醇，因此在花椒生物碱含量测定中采用酸的乙醇溶液作为提取液，结合超声提取的方法，可以保证生物碱成分的提取完全。
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