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中山民森-果胶酶在棉织物前处理中的应用(三)

来源:印染在线 发布时间:2009年08月17日
根据酶促反应动力学的米氏学说[3],从酶被底物饱和的现象出发,按照“稳态平衡”假说的设想,可推导出如下公式:产物生成速率=k3[总酶][底物],([底物]+km)(1)式中:[总酶]——酶的总浓度(mol/mL);[底物]——底物浓度(mol/mL);k3——在酶促反应的第二步,形成最终产物的速率常数;km——米氏常数(mol/mL),其值是当酶反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度。要估计[总酶],首先要固定所有可控制的独立变量,如pH值、温度等。当[底物]Km时,底物对反应速率的影响可忽略(酶饱和),酶促反应达到最大反应速率Vmax,其结果是:产物生成速率=k3[总酶]=Vmax=UU就成为总酶量的一种测量。因此,可以通过测定u来反映酶制剂中有效酶蛋白的含量。2、方法简介粘度降低法:果胶溶于水后形成粘稠状溶液,其粘度和溶解度与其聚合和酯化程度有关。可以利用果胶的这种性质,测其酶活力。即在一定温度、酶浓度下和一定反应时间内,测定标准果胶溶液粘度的降低率。滴定法:果胶酶彻底水解果胶,生成半乳糖醛酸;半乳糖醛酸可与碘(过量)反应。反应后剩余的碘可用硫代硫酸钠溶液滴定,据此可得出酶解反应产生的半乳糖醛酸的量。以生成半乳糖醛酸的量衡量果胶酶的活力。分光光度法:果胶酶分解果胶,产生带有还原性醛基的还原糖(以半乳糖醛酸计),一些显色剂可与其发生显色反应。根据颜色深浅的不同,可以通过分光光度计测定果胶酶酶活值的大小。最常用的是DNS比色法,其显色剂为3,5-二硝基水杨酸。横向比较:将粘度降低法用来测定果胶酶的复合酶活力比较准确,但操作过程也相对复杂,且测定灵敏度不高。滴定法设备使用简单,测试重现行好,准确度高,但测定时间长,过程较繁琐,试剂用量较大。而分光光度法测定
的灵敏度、准确度均高,重现性好,试剂用量少,尤其是操作省时、简便。对于上述3种测定方法,根据纺织行业的特点,我们认为分光光度法更适于纺织工作者应用。

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