纤维素酶DNS酶活力测定方法

一 准备工作

精确称取1 g 酶粉，用蒸馏水定容到200ml，配制5g/L的稀释酶液。 准备好新华1号滤纸条，规格：1cm Χ 6cm。 配备pH = 4.8的醋酸缓冲溶液。 按照下表配备3，5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）：二 标准葡萄糖曲线绘制（吸光度值与葡萄糖含量线性回归）按下表1-1各取1 mg/ml标准葡萄糖液、3，5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）：表1-1在沸水浴中反应15 min，冷却后定容到25 ml，在λmax = 550nm下，用分光光度计测量吸光度值，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖量为横坐标，绘制标准曲线。或用Excel进行相应的线性回归。

三 滤纸酶活力测定

将新华1号滤纸一条放入有标准刻度的试管中。 精确加入1.8 ml pH = 4.8醋酸缓冲溶液。 精确加入5g/L的稀释酶液0.2 ml，摇匀。 在50±1℃水浴中保温反应60min。 保温反应结束，精确加入3ml DNS试剂。 放入沸水浴中反应15min（注意：将8空白对照液同浴反应）。 冷却后加入蒸馏水定容到25ml。 空白对照液的配制： (1)精确加入0.2ml稀释酶液。(2)精确加入1.8 ml pH = 4.8醋酸缓冲溶液。(3)放入新华1号滤纸一条。(4)精确加入3ml DNS试剂。(5)随同对照样，放入沸水浴中反应15min(注意：参见操作步骤6)。(6)冷却后加入蒸馏水定容到25ml。

9．以空白对照液调零点，在λmax = 550nm下，用分光光度计测量吸光度值。滤纸酶活力 = A × 5 × 200 × 1000 / 60 （u/g）A 吸光度值在标准曲线上对应的葡萄糖量（mg）。