利用微生物产生的纤维素酶将纤维素糖化,再经发酵转化成燃料乙醇,不仅可以充分利用生物质资源.更重要的是可以缓解化石能源短缺带来的全球性能源危机。
产纤维素酶的微生物主要是真菌中的木霉和曲霉,但这类菌的最大缺点就是Β-葡萄糖苷酶的产量和活力很低.而且对葡萄糖的耐受性也很差。在纤维素分解过程中,由葡聚糖内切酶和葡聚糖外切酶转化生成的纤维二糖若不能被一葡萄糖苷酶及时地转化为葡萄糖,就很容易形成产物积累.在浓度较高时就会抑制纤维素酶的合成。这也是利用木霉等真菌菌株工业化生产纤维素酶产量或酶活偏低、生产成本偏高的主要原因。
本实验室保藏的Z28是一株纤维素酶高产菌,是一株罕见的肉座菌(Hypocreasp.),其Β-葡萄糖苷酶活力相当高。本研究对Z28的最佳生长及产纤维素酶的液体发酵工艺进行了研究,以期为将来的工业化推广应用提供理论依据。
1试验内容
1.1试验材料
菌种Z28由本实验室保藏;pNPG(对硝基酚一B—D一葡萄糖苷)购自Sigma公司;Whatmanl号定性滤纸购自广州捷倍思生物科技有限公司:绿色木霉(Trichodemaviride)AS3.2774和AS3.3002由中科院微生物所菌种保藏中心提供。
1.2试验用培养基
生长培养基:20g葡萄糖,2g(NH4)2S04,2gKH2P04,0.3gMgSO4·7H20,0.3gCaC12,5mgFeS O4.H2O,1.6mgMnSO4,1.7mgZnC12,l000mL水。
种子培养基(PDA):20g葡萄糖,l000mL马铃薯浸汁,pH值不做调节。
产酶培养基:2gKH2PO4,2.5g(NH4)2S04,0-3gM04·7H20,0.3gCaC12,5mgFeSO4·7H2O,1.6mgMnSO4,1.7mgZnC12,1.7mgCOC12,lmLTween一20,2g稻秆和麦秆,l000mL水。
1.3试验方法
1.3.1细菌干重的测定
将菌体培养液过滤后得到的菌丝置于80℃烘箱中烘干至恒重后称取质量。
1.3.2玎维豢的制箭
将在PDA上培养3d的种子液按2%的接种量接种到产酶培养基上,在温度为30℃,转速为160r/min的条件下发酵5d,离心发酵液,取其上清液作为试验酶液。
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