酶制剂专一性强,加工效果好,易生物降解,用量较少,环保无污染,越来越受到人们的欢迎。抛光酶主要用于棉织物除杂和抛光加工,它可以有效地去除织物表面细小的纤维杂质,且对织物色泽影响小,具有较好的抛光和保色效果。本文以TF一161为例,通过测定抛光酶的活力,找出最佳酶活测定条件。同时用抛光酶对棉织物进行抛光加工,得到最优的加工工艺条件,对实际生产加工有一定的指导作用。
1酶活的测定
1.1原理
抛光酶是纤维素酶原液与其它表面活性剂类物质的复配物。在一定温度和pH值条件下,纤维素酶催化纤维素底物(滤纸、CMC—Na等)水解,释放出还原糖。在碱性、煮沸条件下,3,5一二硝基水杨酸(DNS试剂)与还原糖发生显色反应,其颜色的深浅与还原糖(以葡萄糖计)含量成正比。通过在最大吸收波长下测该溶液的吸光度,可得到产生还原糖的量,从而计算出纤维素酶的滤纸酶活力。
1.2主要试剂和溶液
1.2.1 3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂
试验中所用试剂均为分析纯。称取酒石酸钾钠91g,溶于500mL水中,在溶液中依次加入3,5一二硝基水杨酸3.15g和氢氧化钠2Og,加热搅拌溶解;再依次加入苯酚(重蒸)2.5g和无水亚硫酸钠2.5g,搅拌溶解;待全部溶解并澄清后,冷却至室温,用水定容至1000mL;过滤,贮存于棕色试剂瓶中,于暗处放置7d后使用。
1.2.2乙酸缓冲溶液
称取三水乙酸钠8.16g,溶于约750mL水中,加入乙酸2.31mL,用水定容至1000mL,调节溶液的pH值至4.8±0.05,备用。
1.2.3葡萄糖标准溶液
称取一定量葡萄糖精确至0.1mg,于(103±2)℃下,烘干至恒重。用水溶解配制成6umol/mL的葡萄糖溶液,用碘量法滴定,得出其准确浓度。分别吸取不同体积的葡萄糖标准贮备溶液定容,进行标准曲线制作。
1.2.4快速定性滤纸
杭槲新华一号滤纸(1cmx6cm,每批滤纸使用前需用标准酶校正)。
1.3设备与仪器
UV-2450紫外分光光度计
1.4酶活测定步骤】
取四支15mL具塞刻度试管(一支空白管,三支样品管),将折成M型的滤纸条分别放人每支试管的底部。分别向四支试管中准确加入相应pH值的缓冲溶液1.50mL,并分别准确加入稀释待测酶液0.50mL于三支样品管中(空白管不加),使管内溶液浸没滤纸,盖塞。将四支试管同时置于(50±0.1)℃水浴中,准确计时反应60min;取出,立即精确地向各管中加入DNS试剂2.0mL,再向空白管中精确加入稀释的待测酶液0.50mL,摇匀。将四支试管同时放人沸水浴中,加热5min;IR出,迅速冷却至室温,加水定容至15mL,摇匀。以空白管(对照液)调节仪器零点,在分光光度计上于500nm波长下,用10mm比色杯,分别测量三支平行管中试样溶液的吸光度,取平均值,以该值查标准曲线,或用线性回归方程求得还原糖的含量,并根据定义计算酶活力值。
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